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凱氏定氮儀測定蛋白質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)方程式

更新時間:2021-09-14  |  點擊率:2143
   凱氏定氮儀是根據(jù)蛋白質(zhì)中氮的含量恒定的原理,通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質(zhì)含量的儀器。因其蛋白質(zhì)含量測量計算的方法叫做凱氏定氮法。蛋白質(zhì)測定常用的方法就是凱氏定氮法,它是通過測定氮含量從而換算成蛋白質(zhì)的方法,是國際上通用的標(biāo)準(zhǔn)方法,其優(yōu)點為實驗操作簡單、方便,測量結(jié)果的重復(fù)性和重現(xiàn)性好,而被廣泛應(yīng)用于各類食品、谷物、飼料等樣品的蛋白質(zhì)含量測定中。凱氏定氮法分為常量、半微量、微量法三種方法,其原理是食品中的蛋白質(zhì)在催化加熱條件下被分解,產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)的含量。
  一、實驗?zāi)康模簻y得樣品純牛奶中粗蛋白含量
  二、實驗設(shè)備及要求:
  1、實驗設(shè)備:天平、凱氏定氮儀以及消解儀
  2、實驗要求:測試環(huán)境要求潔凈,測試所用試劑與器皿均要求潔凈;
  三、該方法的化學(xué)反應(yīng)方程式為:
  2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4→(NH4)2SO4+CO2↑+SO2↑+16H2O
  此過程的注意事項:
 ?、贅悠废瘯r,對于含糖量很高或含脂量較多的樣品,應(yīng)注意要緩慢升溫加熱,并隨時注意控制加熱的溫度,避免產(chǎn)生大量泡沫噴出或噴濺到瓶壁上,造成樣品的損失。若因加熱溫度不當(dāng),局部溫度過高使消化液噴濺到瓶壁上,應(yīng)及時轉(zhuǎn)動凱氏定氮瓶將濺到瓶壁上的樣品消化液沖下,也可在樣品消化前加入少量辛醇或液體石蠟,以減少泡沫的產(chǎn)生。
 ?、谙瘯r應(yīng)不定時旋轉(zhuǎn)凱氏定氮瓶,將附在瓶壁上的碳粒沖下,使樣品充分消化。
  ③若樣品難以消化至澄清透明的程度,可將凱氏定氮瓶從加熱器上取下,待其中溶液冷卻至室溫后,向消化液中加入少量過氧化氫,再繼續(xù)加熱直至*消化。
 ?、苷麄€消化過程中硫酸的量要充足,以保證樣品中含氮有機化合物的消化。樣品中脂肪含量過高時,要增加硫酸的量,因消化時脂肪消耗硫酸的量較大,使硫酸缺少而影響測定。
 ?、菰跇悠废┢?,即消化液呈藍綠色并澄清透明后,再繼續(xù)加熱半小時即可,因此時瓶內(nèi)消化液溫度過高,若長時間加熱,會使生成的硫酸氫銨分解并釋放出氨氣,使氮的含量損失,從而影響凱氏定氮儀的測定結(jié)果。
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